Государственная фармакопея Республики Беларусь -
Скачать (прямая ссылка):
После испарения растворителей из нанесенных проб в желоб хроматографической камеры вводят с помощью шприца или пипетки достаточное количество подвижной фазы, помещают пластинку горизонтально в хроматографическую камеру и подсоединяют устройство для подачи подвижной фазы в соответствии с инструкцией производителя. Если указано в частной статье, пластинку элюируют, начиная одновременно с двух концов. Камеру закрывают и проводят хроматографирование при температуре от 20оС до 25оС. После того, как подвижная фаза пройдет расстояние, указанное в частной статье, пластинку вынимают, сушат и обнаруживают пятна указанным способом.
В случае двухмерной хроматографии после первого хроматографирования пластинку сушат и выполняют второе хроматографирование в направлении, перпендикулярном первому.
ВИЗУАЛЬНАЯ ОЦЕНКА
Идентификация. Основное пятно на хроматограмме, полученной для испытуемого раствора, сравнивают визуально с соответствующим пятном на хроматограмме, полученной для раствора стандартного образца (раствора сравнения), сравнивая окраску (цвет флуоресценции), размер и величину удерживания (Rf) обоих пятен.
Величину удерживания (Rf) определяют как отношение расстояния от точки нанесения пятна до центра кромки пятна после хроматографирования к расстоянию, пройденному фронтом растворителя от точки нанесения.
Проверка разделяющей способности неподвижной фазы для идентификации. Обычно для оценки пригодности достаточно испытания на пригодность неподвижной фазы, описанного в разделе «Реактивы». В особых случаях дополнительные требования указывают в частных статьях.
Испытание на сопутствующие примеси. Дополнительное пятно (пятна) на хроматограмме, полученной для испытуемого раствора, сравнивают визуально с соответствующим пятном (пятнами) на хроматограмме, полученной для раствора сравнения. В качестве стандартного образца для приготовления раствора сравнения используют как саму примесь (примеси), так и различные разбавления испытуемого раствора.
Проверка разделяющей способности. Требования для проверки разделяющей способности приводят в соответствующих частных статьях.
Проверка чувствительности. Чувствительность считается
удовлетворительной, если пятно или полоса четко обнаруживаются на хроматограмме, полученной с наиболее разбавленным раствором сравнения.
# Проверка пригодности хроматографической системы. Результаты анализа методом тонкослойной хроматографии считаются достоверными, если выполняются требования испытания «Проверка пригодности хроматографической системы».
Хроматографическая система считается пригодной если:
- на хроматограмме раствора сравнения, используемого для проверки
пригодности хроматографической системы, четко разделяются пятна указанных в частной статье веществ;
- величина Rf основного пятна на хроматограмме испытуемого раствора должна быть близка, указанной в частной статье;
- на хроматограмме раствора сравнения, используемого для проверки
чувствительности хроматографической системы, должно быть четко видно пятно.
# СПОСОБЫ ОЦЕНКИ СОДЕРЖАНИЯ ПРИМЕСЕЙ МЕТОДОМ ТСХ
При контроле примесей нежелательно включение в частную статью требования отсутствия пятна контролируемой примеси на хроматограмме испытуемого раствора.
Методом ТСХ могут контролироваться как конкретно указываемые
(специфические) примеси, так и общее содержание примесей.
Контроль специфических примесей. Контроль специфических примесей применяют в тех случаях, когда содержание каких-то конкретных примесей, возникающих в процессе производства лекарственного средства или его хранения, должно быть ограничено ввиду их токсичности или по другим соображениям.
При контроле специфических примесей обычно используют сравнение пятен регламентированных примесей на хроматограммах испытуемого раствора и раствора сравнения.
Контроль общего содержания примесей. В тех случаях, когда нет оснований считать какие-то примеси особо токсичными, часто не так важно знать их истинное содержание. Важно знать, что это содержание не превосходит определенного уровня. В таких случаях используют метод внутренней нормализации - в качестве растворов сравнения обычно используют растворы самой испытуемой субстанции различной концентрации, а содержание примесей находят в пересчете на эту субстанцию.
В зависимости от количества различных растворов субстанции, наносимых на хроматограмму в виде растворов сравнения, контроль общего содержания примесей может быть одноуровневым, двухуровневым и трехуровневым.
В двух- и трехуровневом вариантах возможна регламентация и общей суммы примесей.
КОЛИЧЕСТВЕННЫЕ ИЗМЕРЕНИЯ
Требования к разрешению и разделению приводят в частных статьях.
В том случае, когда вещества, разделяемые методом тонкослойной хроматографии, поглощают или флуоресцируют в ультрафиолетовом или видимом свете, их можно количественно определить непосредственно на пластинке, используя подходящее оборудование. Для этого измеряют отражение или пропускание падающего света, передвигая пластинку или измеряющее устройство. Аналогичным образом, используя подходящее оптическое оборудование, можно измерять флуоресценцию. Вещества, содержащие радионуклиды, могут быть количественно определены тремя способами:
